黑色素瘤細(xì)胞株在培養(yǎng)瓶長成致密單層后，已基本上飽和，為使細(xì)胞株能繼續(xù)生長，同時(shí)也將細(xì)胞株數(shù)量擴(kuò)大，就必須進(jìn)行傳代（再培養(yǎng)）。傳代培養(yǎng)也是一種將細(xì)胞株種保存下去的方法。同時(shí)也是利用培養(yǎng)黑色素瘤細(xì)胞株進(jìn)行各種實(shí)驗(yàn)的必經(jīng)過程。懸浮型黑色素瘤細(xì)胞株直接分瓶就可以，而貼壁細(xì)胞株需經(jīng)消化后才能分瓶。一般使用蛋白水解酶（比如胰蛋白酶）消化貼壁細(xì)胞株成單個(gè)細(xì)胞株，也可加入乙二胺四乙酸（EDTA）提高消化能力，EDTA 是一種二價(jià)離子的螯合劑，能抑制黑色素瘤細(xì)胞株膜上的Ca2+和Mg2+。常用的細(xì)胞株消化液一般含有0.25%(w/v)的胰酶和0.03% (w/v) EDTA，一般用不含Ca2+和Mg2+的鹽溶液配置，先用胰酶-EDTA 消化液清洗細(xì)胞株（5.0 -10.0 ml/75cm），然后棄去消化液，重新加入少量的胰酶-EDTA 消化液(2.0 to 5.0 ml/75 sq. cm flask) ，觀察細(xì)胞株直到細(xì)胞株變圓脫離瓶壁，此過程一般需要5-15分鐘，為了避免細(xì)胞株成團(tuán)，消化黑色素瘤細(xì)胞株的過程中不要拍打細(xì)胞株瓶。對(duì)于特別難消化的細(xì)胞株，可以加入胰酶EDTA 消化液后把細(xì)胞株置于37°C 促進(jìn)消化，細(xì)胞株脫離瓶壁后，立刻加入含有血清的*培養(yǎng)基中止消化，血清中某些蛋白質(zhì)能夠抑制胰酶的活性。一般情況下，離心并不需要。如果
黑色素瘤細(xì)胞株需要無血清或者低血清的培養(yǎng)基，可以以125000g 轉(zhuǎn)速離心5分鐘，然后棄去中止用的培養(yǎng)基，加入適合的新的培養(yǎng)基輕輕混勻細(xì)胞株，移入到新的培養(yǎng)瓶。傳代的比例視細(xì)胞株類型而定，一般是1:2-1:20，具體比例可參考說明書。胰蛋白酶會(huì)對(duì)某些細(xì)胞株的黑色素瘤細(xì)胞株膜產(chǎn)生損傷，對(duì)于這種類型的細(xì)胞株，可用細(xì)胞株刮輕輕刮下細(xì)胞株，加入適量的培養(yǎng)基，輕輕吹打混勻細(xì)胞株，然后進(jìn)行傳代培養(yǎng)。
為了防止因污染或技術(shù)原因使長期培養(yǎng)功虧一簣，考慮到培養(yǎng)黑色素瘤細(xì)胞株因傳代而遲早會(huì)出現(xiàn)變異，有時(shí)因寄贈(zèng)、交換和購買，培養(yǎng)細(xì)胞從一個(gè)實(shí)驗(yàn)室轉(zhuǎn)運(yùn)到另一個(gè)實(shí)驗(yàn)室，*的策略是進(jìn)行低溫保存。這對(duì)于維持一些特殊黑色素瘤細(xì)胞株的遺傳特性極為重要?，F(xiàn)簡要介紹深低溫保存法(-70℃~-196℃)的特點(diǎn)。細(xì)胞深低溫保存的基本原理是：在-70℃以下時(shí)，細(xì)胞內(nèi)的酶活性均己停止，即代謝處于*停止?fàn)顟B(tài)，故可以長期保存。細(xì)胞低溫保存的關(guān)鍵，在于通過0~20℃階段的處理過程。在此溫度范圍內(nèi)，水晶呈針狀，極易招致細(xì)胞的嚴(yán)重?fù)p傷。
傳代黑色素瘤細(xì)胞株可提供復(fù)蘇，凍存細(xì)胞，ATCC細(xì)胞。具體可根據(jù)科研人員要求決定。代做各種細(xì)胞服務(wù)。
對(duì)于貼壁細(xì)胞應(yīng)先吸（倒）盡培養(yǎng)基，吸的越干凈越好，以免中和后加入的消化液，使強(qiáng)度減弱（或PBS洗1－3次）。50ml培養(yǎng)瓶加入消化液約1-3ml，按此比例進(jìn)行消化，晃動(dòng)使消化液鋪均勻置37度培養(yǎng)箱約2-5分鐘，鏡下見細(xì)胞收縮變圓或少數(shù)脫落后，輕輕振動(dòng)瓶底使細(xì)胞全部脫落，加入2-3ml*培養(yǎng)基后，輕輕吹打，使黑色素瘤細(xì)胞株基本成單個(gè)懸浮，然后分置其它無菌培養(yǎng)瓶內(nèi)，加入*培養(yǎng)基后繼續(xù)培養(yǎng)或?qū)嶒?yàn)。
